بحث منشور للدكتور عبدالأمير عبدالله الموسوي حول الفعالية ضد الجرثومية لمستخلصات نباتي Frankenia pulverulenta L. و Allium cepa L
تاريخ النشر : 2014-09-14 17:55:35
عدد المشاهدات : 3176
تاريخ النشر : 2014-09-14 17:55:35
عدد المشاهدات : 3176
v\:* {behavior:url(#default#VML);} o\:* {behavior:url(#default#VML);} w\:* {behavior:url(#default#VML);} .shape {behavior:url(#default#VML);}
Normal 0 false false false false EN-US X-NONE AR-SA MicrosoftInternetExplorer4 st1\:*{behavior:url(#ieooui) } /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable {mso-style-name:"جدول عادي"; mso-tstyle-rowband-size:0; mso-tstyle-colband-size:0; mso-style-noshow:yes; mso-style-priority:99; mso-style-qformat:yes; mso-style-parent:""; mso-padding-alt:0cm 5.4pt 0cm 5.4pt; mso-para-margin:0cm; mso-para-margin-bottom:.0001pt; mso-pagination:widow-orphan; font-size:10.0pt; font-family:"Times New Roman","serif";}
الفعالية ضد الجرثومية لمستخلصات نباتيL. Allium cepa و Frankenia pulverulenta L.
غزوان طالب الجابر ,عبد الأمير عبد الله الموسوي
قسم علوم الحياة,كلية التربية ,جامعة البصرة,البصرة,العراق.
(الاستلام 22 تموز 2008 , القبول 5 تشرين الاول 2008 )
الخلاصة
اختبرت الفعالية ضد الجرثومية لمستخلصات اثنين من النباتات هما نبات البصل الاحمر Allium cepa و نبات الفرانكينياFrankenia pulverulenta ، وتتضمن مستخلصات كل نبات : مستخلص ميثانولي 70% حار ومستخلص فلافونويدي ومستخلص الدهون الاساسية ، واختبرت تلك المستخلصات على ستة انواع من الجراثيم ثلاثة منها قياسية وهي Escherechia coli ATCC25922 وStaphylococcus aureus ATCC25923 و Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 ، اما الانواع الاخرى فهي من الانواع السريرية وهي Brucella melitensis وStaphylococcus aureus و Pseudomonas aeruginosa .
لقد أظهرت الدراسة الحالية ان هنالك تباين ملحوظ بين نتائج فعالية تلك المستخلصات مع وجود أفضلية للمستخلص الكحولي لنبات البصل الاحمر يليه المستخلص الفلافونويدي لنفس النبات ، وحل مستخلص الدهون الاساسية والمستخلص الفلافونويدي لنبات الفرانكينيا بالمرتبة الثالثة . وسجلت الدراسة كذلك حصول ظاهرة التآزر Synergism بين المكونات الكيميائية لنبات البصل الاحمر . كما وبينت نتائج الكشوفات النوعية لمكونات النباتين ان كلا النباتين يحتويان على قلويدات وفلافونويدات وتانينات وصابونينات وفينولات .
المقدمة
لقد استخدمت النباتات في مختلف ارجاء العالم وقبل الاف السنين في معالجة الامراض ذات المسبب المايكروبي ، لا زال حالياً الكثير من الناس في المدن النامية يؤكدون على اهمية استخدام النواتج الطبيعية للنباتات الطبية كعلاج [1] .
ان ما بين 25-50 % من انواع العلاجات المستخدمة حالياً هي ذات اصل نباتي ، اذ ان النباتات تعتبر غنية بنتائج الايض الثانوية ذات الخصائص الضد مايكروبية والمتمثلة بالتانينات Tanninsوالتربنويدات Terpenoids والقلويدات Alkaloids والفلافونويدات Flavonoids ، ان نسبة 1-10% من النباتات فقط تستخدم كمصدر غذائي انساني او حيواني [2].
لقد تناولت الدراسة الحالية نباتين من النباتات ذات الاهمية الطبية هما نبات البصل الاحمر Allium cepaونبات الفرانكينيا Frankenia pulverulenta، ينتمي نبات البصل الاحمر الى العائلة النباتية Liliaceae [3] ، وهو من النباتات التي تمتلك فعالية ضد جرثوميةAntibacterial وكذلك ضد التهابية Anti inflammatory و يمتلك عوامل مضادة للأكسدة Antioxidant [4 ، 5 ، 6] .
يحتوي البصل ضمن تركيبه الكيميائي على المركبات Thiosulphinate , Cepaene , Allicin والتي تعمل على تثبيط الالتهابات في مراحله الاولية ، ويعتقد ان مركب S-propenylcysteine sulphoxide هو المسؤول عن التاثير الضد جرثومي [4] .
ان نبات البصل يحتوي على مركب فلافونويدي وهو Quercetin هو ذو اهمية ضد مايكروبية [5 ، 6] ، اما نبات الفرانكينيافهو ينتمي الى العائلة النباتية Frankeniaceae [7] ، وهو ايضاً من النباتات ذات الاهمية الطبية ، اذ يحتوي جنس Frankenia على العديد من الانواع وان هنالك عدة دراسات اثبتت الاهمية الضد مايكروبية لتلك الانواع نذكر منها دراسة [8] على النوع F. corymbosa Desf. الذين ذكروا الاهمية الضذ جرثومية للنوع المذكور ، ومصدر اخر [9] ذكر اهمية النوع F. grandifoliaفي معالجة امراض الاغشية المخاطية ومعالجة حالات الاسهال والدزنتري والتهاب المهبل وذات السحايا .
اما النوع المستخدم في الدراسة الحالية F. pulverulenta فلم يتسنى الحصول سوى على دراسة واحدة تناولت اهميته كمسكن ومهدئ [10] .
تعتبر الفلافونويدات نواتج طبيعية تتكون في النباتات [11] ، ون التركيب الكيميائي للمركب الفلافونويدي عبارة عن حلقتي بنزين مرتبطة بحلقة غير متجانسة تحتوي على ذرة اوكسجين واحدة أي انها عبارة عن مركبات فينولية تحمل مجموعة كاربونيل ومجموعة او اكثر من مجاميع الهايدروكسيل [12] .
ان للمركبات الفلافونويدية اهمية ضد مايكروبية ضد عدد كبير من الاحياء المجهرية [5 ، 6] ، وان تاثير الفلافونويدات الضد مايكروبي ناتج عن قدرتها على تكوين معقد مع بروتينات الجدار الخلوي والبروتينات الذائبة الداخل خلوية لجسم الخلية الجرثومية ، فضلاً عن قدرتها على تحطيم الغشاء الخلوي للخلية الجرثومية [2] .
تعتبر الزيوت الاساسية من مركبات الايض الثانوية في النبات وهي تسمى بالتربينات Terpenes ذات تركيب كيميائي C10 H16، ويمكن ان تظهر بشكل تربينات ثنائية وثلاثية ورباعية ، فضلاً عن ظهورها بشكل مركب Hemiterpenes (C5) ومركب Sesquiterpenes (C15) ، وعند احتواء التربينات على عنصر اضافي مثل الاوكسجين فيطلق عليها اسم التربنويدات Terpenoides ، ان للتربينات والتربنويدات اهمية ضد جرثومية ، وعلى الرغم من ان الية فعلها على الخلية الجرثومية غير مفهومة بشكل جيد ولكن يعتقد انها تعمل على تحطيم غشاء الخلية الجرثومية [ 2] .
ونظراً للأهمية الطبية للنباتين موضوع البحث أجريت الدراسة الحالية لاختبار مستخلصاتهما على مجموعة من الانواع الجرثومية الموجبة والسالبة الكرام بهدف معرفة فعاليتها ضد الجرثومية .
المواد وطرائق العمل
1 . الانواع الجرثومية المستخدمة في الدراسة :
اختيرت ستة انواع من الجراثيم ، ثلاثة انواع منها كانت قياسية وهي Escherechia coli ATCC25922 وStaphylococcus aureus ATCC25923 و Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 جلبت من مختبر ابحاث المناعة – كلية العلوم / جامعة البصرة وكانت محفوظة في المرق المغذي Nutrient broth، اما الانواع الاخرى وهي Brucella melitensis وStaphylococcus aureus و Pseudomonas aeruginosa فهي من الانواع السريرية ، عزل النوع Brucella melitensisمن دم الاشخاص المصابين بداء Brucellosis في محافظة البصرة ، وعزل النوعان الاخيران في مستشفى البصرة العام .
أكد تشخيص العزلات السريرية في مختبر ابحاث البكتريا - كلية التربية / جامعة البصرة بالاعتماد على [13 ، 14] .
2 . جمع العينات النباتية :
جمع نبات الفرانكينيا من داخل جامعة البصرة (موقع كرمة علي) وقد استخدمت جميع اجزاء النبات في الدراسة ، في حين جمع نبات البصل الاحمر من السوق المحلية فقد اخذت اوراق الطبقتين الخارجيتين من البصلة فقط ، جلبت العينات الى المختبر وصنفت من قبل مختصين بتصنيف النبات في قسم علوم الحياة / كلية التربية ، ثم نشرت بدرجة حرارة المختبر بعد تنظيفها من الشوائب وتركت لتجف ، طحنت العينات باستخدام مطحنة كهربائية ، وحفظت المساحيق النباتية في قناني نظيفة وجافة وذات غطاء محكم وعلمت بأسماء النباتات .
3. تحضير المستخلصات النباتية :
أ. استخلاص الدهون الاساسية : وقد اتبعت طريقة [15] في استخلاص الدهون الاساسية وهي طريقة الاستخلاص المستمر ، اذ وضع 40 غراماً من النبات المطحون في وعاء ورقيThumble ووضع في جهاز الاستخلاص Soxhlet واستخدم 250 مل من مذيب n-Hexan ولمدة 24 ساعة ، استخلصت الزيوت بعدها ركز المحلولبواسطة جهاز المبخر الدوار(Rotary Evaporator)وحفظ لاختبار فعاليته الضد جرثومية لاحقاً .
ب. المستخلص الكحول الاثيلي 70 % الحار : وقد اتبعت طريقة [(15حيث مزج (40) غم من مسحوق النبات المزال عنه الدهون وفقاً للفقرة (أ) مع 250 مل من الايثانول المائي70% واجريت عملية الاستخلاص الترجيعي Reflex للمحلول لمدة 16 ساعة، ومن ثم برد المحلول ورشح ، ثم ركز بواسطة المبخر الدوار الى حوالي 10 مل. ثم جفف المستخلص بوضعه في طبق بتري Petri dish ، بعد ذلك تم جمعه ووضعه في قنينة معتمة لحين الاستخدام.
ج .المستخلص الفلافونويدي [16]: فقد مزج 50 غم من مسحوق النبات المزال عنها الدهون وفقاً للطريقة(أ) مع 250 مل من الايثانول المائي 70% واجريت له عملية الاستخلاص الترجيعي Reflex لمدة 16 ساعة، ثم برد المحلول ورشح ، ثم ركز المحلول الى حوالي 50 مل بواسطة المبخر الدوار . وضع المحلول المتبقي في قمع فصل وتم استخلاصه بمذيب خلات الاثيل Ethel acetate 50 مل ، بعدها جففت طبقة خلات الاثيل للحصول على الفلافونويدات .
4 . الكشوفات النوعية : اجريت مجموعة من الكشوفات النوعية للتعرف على المكونات الكيميائية في المستخلص الكحولي الحار لكل من النباتين :
1. كشف القلويدات Alkaloid test : تم الكشف عن القلويدات باستخدام الكواشف التالية :
أ. كاشف دراكندروف Dragendroff Reagent [16] : اضيفت عدة قطرات من الكاشف الى (1) مل من المستخلص ، عند ظهور راسب برتقالي تعتبر النتيجة موجبة مما يدلل على وجود القلويدات .
ب. كاشف واكنر Wagner's Reagent [17] : اضيفت عدة قطرات من الكاشف الى (1) مل من المستخلص ، عند ظهور عكورة تعتبر النتيجة موجبة مما يدلل على وجود القلويدات .
2. كشف الفلافونويدات Flavonoid's test[18] : أضيف 1 مل من الكاشف ( هيدروكسيد البوتاسيوم الكحوليEthanolic KOH [5N] ) الى 1 مل من المستخلص ، عند ظهور راسب اصفر تعتبر النتيجة موجبة مما يدلل على وجود الفلافونويدات .
3. كشف التانينات Tannins test [19] : أضيف 1 مل من خلات الرصاص المائية Lead acetate (1%) الى 1 مل من المستخلص ، عند تكون راسب ابيض تعتبر النتيجة موجبة مما يدلل على وجود التانينات .
4. كشف الفينولات Phenol's test [20] :اذيب 0.1 غم من المستخلص في 1 مل من الماء المقطر وأضيفت له 1-2 قطرة من محلول كلوريد الحديديك FeCl3 (1%) ، عند ظهور اللون الازرق او الاخضر تعتبر النتيجة موجبة مما يدلل على وجود الفينولات .
5. كشف الصابونين Saponin test [21] : أضيف 1 مل من كاشف كلوريد الزئبق المائي (5%) الى 1 مل من المستخلص ، عند تكون راسب ابيض تعتبر النتيجة موجبة مما يدلل على وجود الصابونينات .
5. تحضير العالق الجرثومي [22] : حضر العالق الجرثومي للانواع الاربعة باستخدام جهاز المطياف الضوئي Spectrophotometer (LaboMed,inc.U.S.A Spectro SC) فقد كانت كثافة العالق 0.1 تحت طول موجي 540 nm وقد استخدم في تخفيف العالق ماء مقطر معقم .
6. اختبار فعالية المستخلصات النباتية [22] : استخدمت طريقة الحفر Agar-well diffusion method فقد استخدم في التجربة وسط غذائي من نوع Muller-Hinton argar ونشر العالق الجرثومي باستخدام قطيلات قطنية معقمة (Swabs) وتركت الاطباق مدة 15 دقيقة ، بعد ذلك تم عمل حفر قطر كل حفرة 8 ملم باستخدام ثاقب فليني معقم ، واضيف تركيز 0.15 غم/مل من المستخلص النباتي لكل حفرة باستخدام ماصة معقمة ، ثم حضنت الاطباق بدرجة 37 درجة مئوية لمدة 24 ساعة .
النتائج
1. الكشوفات النوعية : لقد أظهرت نتائج الكشوفات النوعية للمستخلص الميثانولي 70 % الحار لكل من النباتين ، ان كلا النباتين يحتويان على مركبات قلويدية ومركبات فلافونويدية و مركبات فينولية ومركبات تانينية ومركبات صابونية ، فقد كانت نتائج جميع الاختبارات موجبة لمستخلص كلا النباتين وكما مبين في الجدول رقم (1) .
جدول رقم (1) الكشوفات النوعية للمستخلص الكحولي الحار لكل من النباتين
|
المستخلص الكحولي الحار النباتي |
الكشوفات النوعية |
||||
|
كشف القلويدات |
كشف الفلافونويدات |
كشف التانينات |
كشف الصابونين |
كشف الفينولات |
|
|
نبات الفرانكينيا |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
|
نباتالبصل الاحمر |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
2. الفعالية ضد الجرثومية لمستخلصات النباتين : لقد اظهرت نتائج الفعالية ضد الجرثومية ان هنالك تبايناً ملحوظاً بين مستخلصات النباتين ، مع وجود افضلية للمستخلص الكحولي لنبات البصل الاحمر .
يبين الجدول رقم (2) الفعالية ضد الجرثومية لمستخلصات النباتين ، فقد كانت فعالية المستخلص الكحولي لنبات البصل عالية اذ بلغت ضد جراثيم E. coli ATCC25922 25 ملم ، وبلغت ضد جراثيم S. aureus ATCC25923 27 ملم ، وضد جراثيم S. aureusالسريرية بلغت 17 ملم ، وضد جراثيم P. aeruginosa ATCC27853 بلغت 16 ملم ، وضد جراثيم P. aeruginosa السريرية بلغت 13 ملم ، وضد جراثيم B. melitensis بلغت 22 ملم .
في حين انخفضت فعالية نبات البصل في المستخلص الفلافونويدي لتكون ضد جراثيم E. coli ATCC25922 17 ملم ، وضد جراثيم S. aureus ATCC25923 بلغت22 ملم ، وضد جراثيم S. aureusالسريرية بلغت 12 ملم ، وضد جراثيم P. aeruginosa ATCC27853 بلغت 11 ملم ، ولم يبدي المستخلص الفلافونويدي لنبات البصل الاحمر أي فعالية تذكر ضد جراثيم P. aeruginosa السريرية ، في حين كانت فعاليته ضد جراثيم B. melitensis 20 ملم ، ولم يبدي مستخلص الدهون الاساسية لنبات البصل الاحمر أي فعالية تجاه جميع الانواع الجرثومية المستخدمة في الدراسة ، وكما موضح في الشكل رقم (1) .
جدول رقم (2) الفعالية ضد الجرثومية لمستخلصات النباتين
|
النبات |
نوع المستخلص |
قطر منطقة تثبيط الجراثيم بـالملم |
|||||
|
E. coli |
Staph. aureus القياسية |
Staph. aureus السريرية |
Ps. aeruginosaالقياسية |
Ps. aeruginosaالسريرية |
B. melitensis |
||
|
البصل الاحمر |
ميثانولي 70 % حار |
25 |
27 |
17 |
16 |
13 |
22 |
|
فلافونويدي |
17 |
22 |
12 |
11 |
0 |
20 |
|
|
دهون اساسية |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
|
|
الفرانكينيا |
ميثانولي 70 % حار |
7 |
0 |
0 |
7 |
17 |
10 |
|
فلافونويدي |
13 |
9 |
0 |
16 |
12 |
15 |
|
|
دهون اساسية |
13 |
9 |
0 |
17 |
7 |
17 |
|
ويوضح الجدول رقم (2) والشكل رقم (2) الفعالية ضد الجرثومية لمستخلصات نبات الفرانكينيا ، فقد كانت فعالية المستخلص الكحولي للنبات ضد جراثيم E. coli ATCC25922وجراثيم P. aeruginosa ATCC27853 7 ملم ، وبلغت فعاليته ضد جراثيم P. aeruginosa السريرية 17 ملم ، وكانت 10 ملم ضد جراثيم B. melitensis في حين لم يبدي المستخلص الكحولي للنبات أي فعالية تذكر ضد جراثيم S. aureus ATCC25923 وجراثيم S. aureusالسريرية .
ازدادت فعالية النبات في المستخلص الفلافونويدي لتصبح 13 ملم ضد جراثيم E. coli ATCC25922و 9 ملم ضد جراثيم S. aureus ATCC25923 و 16 ملم ضد جراثيم P. aeruginosa ATCC27853 و 12 ملم ضد جراثيم P. aeruginosa السريرية و 15 ملم ضد جراثيم B. melitensis ، ولم يبدي المستخلص الفلافونويدي للنبات أي فعالية ضد جراثيم S. aureusالسريرية.
في حين اظهر مستخلص الدهون الاساسية لنبات الفرانكينيا فعالية ملحوظة قياساً بفعالية الدهون الاساسية لنبات البصل الاحمر ، فقد كانت فعالية الدهون لنبات الفرانكينيا ضد جراثيم E. coli ATCC25922 13 ملم ، و 9 ملم ضد جراثيم S. aureus ATCC25923 و 17 ملم ضد جراثيم P. aeruginosa ATCC27853 و 7 ملم ضد جراثيم P. aeruginosa السريرية و 17 ملم ضد جراثيم B. melitensisولم يبدي مستخلص الدهون الاساسية للنبات أي فعالية ضد جراثيم S. aureusالسريرية.